植物茎尖培养是指取植物茎尖组织放入培养液中进行的无菌培养。常用于生产无毒苗的培养技术。
(一)实践目的
通过实践学习和练习，掌握植物茎尖培养基本技术。
(二)实践用具与材料
超净工作台、18cm手术弯剪、16cm镊子、接种盘、毛刷、纱布、培养瓶。培养基250瓶、洗衣粉1袋、2%新洁尔灭500ml、75%酒精4l、0.1%1l、无菌水。带嫩芽的植物枝条
(三)实践内容
指取植物茎尖组织放入培养液中进行的无菌培养。常用于生产无毒苗的培养技术。
1、外植体的选取及预处理
⑴外植体选取
选取生长健壮、已发芽、长势较好、无病害的生姜根状茎作为外植体。
⑵材料预处理
取带芽的枝条或鳞茎球茎，洗衣粉适量冲洗，然后扳取或用清洁剪刀剪取带芽部位(约1cm×1cm大小)，顶芽和腋芽、大芽和小芽分开。继续用洗衣粉清洗10分钟，清洗时需不停晃动。再用自来水冲洗干净，置空培养瓶备用。
2、超净工作台无菌操作准备
检查超净工作台，是否已开机灭菌，酒精灯、酒精瓶、是否齐备、无菌水、培养瓶放置与位置、接种器械是否齐备与放置。
3、外植体消毒
⑴蒸馏水冲洗
外植体置于已杀菌开机的超净工作台上，新洁尔灭洗液消毒双手，无菌蒸馏水清洗外植体2-3次，需随时晃动。
⑵酒精消毒
75%酒精倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-60s，时间长短视植物材料情况而定，一般幼嫩材料和室内带菌培养材料消毒时间短，老材料或室外材料消毒时间长。动作一定迅速，需晃动，然后将酒精倒去。整个时间计算以酒精倾倒开始至酒精倒出瓶外为止，
⑶消毒
1%生汞倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-10min，时间长短视情况而定。需晃动，在zui后3min静置，注满容器，将已灼烧的镊子放入容器内浸泡。
10%次氯酸钠溶液倒入装外植体的容器内，消毒外植体10-12min，时间长短视情况而定。
⑷蒸馏水清洗
用镊子将外植体取出，放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗，反复清洗4次。
4、材料的整理
用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理，剥离外植体材料芽外部小叶片，露出生长点和2-3片叶原基部分，将此部分剪下做培养材料。再用无菌蒸馏水清洗3-4次。
5、接入培养基
培养基瓶放入工作台内，将剥离的材料分别用消毒过的镊子放入培养瓶内，盖上瓶盖，置培养篮内，写上培养时间、操作人及培养品名，入培养室培养。
6、整理工作
清洁整理超净工作台和实验室。
(五)实践指导
1、操作中严格有菌观念、无菌操作。
2、操作前一定先换上工作服、鞋、清洁双手。
3、超净工作台工作前，检查工作台是否开启紫外灯和风机，酒精灯、消毒器械的酒精、消毒液是否准备齐备。蒸馏水、培养基是否齐备。
4、工作时培养基、蒸馏水、消毒液等放置齐整，器械取出后放入消毒液里，用过的溶液、线和报纸放在工作台外。
5、接种工具不能碰触瓶口和工作台其它部位，手不能碰触瓶口，更不能伸入瓶内，不能碰触材料。
6、无菌水和酒精、处理材料时需不断晃动，便于材料与液体充分接触。
7、酒精、处理材料时间必须适宜，时间短消毒效果不理想，时间长会将材料杀死。
8、操作细致，水不要洒在工作台上，掉落在台面的材料不能再用。
9、操作完毕，须在瓶上注明日期、操作人，便于观察。
10、有些同学器械放置很乱，整个超净工作台面乱七八糟，影响效果。